酪蛋白激酶分析实验基本方案用β-酪蛋白

酪蛋白激酶分析实验基本方案β-酪蛋白实验材料β-酪蛋白(溶于水) 具有酪蛋白激酶活性的酶样酶活性[γ-32P] ATP TCA SDS-PAGE 样品缓冲液仪，耗材30℃ 水浴 P81 磷酸纤维素膜 离心管

每个鉴定反应按以下比例加入 1.5 ml 微离心管：

4 μl 5 × 酪蛋白激酶反应缓冲液1 μl 10 mg/ml β-酪蛋白1 μl [γ-32P] ATP 溶液（ATP 较终浓度为 5 μmol/L， 5 放射活性μCi/μl）1～14 μl 水盖离心管，混合均匀，放入 30℃ 水浴温育 10 min。

加入 1～14 μl 酪蛋白激酶活性酶样本开始反应。℃ 水浴，10 min。添加适当的试剂，按不同的分析方法停止反应：添加 20 μl 10% TCA 进行 TCA 沉淀，或 10～20 ml 2 预冷× SDS-PAGE 电泳分析样品缓冲液。继续分析这些方法中的一种。

注意事项

对于 Cr反应混合物也可用于 酪蛋白。每种反应的体积为 20 μl。 2 中的水量取决于所使用的酶样品的数量。添加酶的量取决于样品中酶活性的大小。磷酸转移反应的程度可以通过预试验获得的较大反应值来衡量。为了保持磷酸基与底物的线性结合，可以适当减少酶的增加。